V redu, fantje! Čas je, da z vami delim nekaj znanja. Opisal bom sintezo, ki sem jo opravil za psilocin, skupaj s fotografijami. Pridobljeni psilocin sem uporabil in razvil preprost lepilni obliž. Da bi preizkusili prepustnost psilocina v obližu, smo uporabili difuzijski aparat, ki sem ga sestavil. Vključuje več membran, pri čemer je obliž velikosti 1 cm^2 položen na 1 cm^2 svežega kosa človeške kože debeline 400 um (podarili so ga v kirurškem centru za trebušne operacije). Pod kožo je stalen pretok vode s pH 7,4 in telesno temperaturo. Difuzijski aparat lahko na uro zbere 1 ml frakcije, ki se nato analizira z LC-MS. Količina psilocina v 1-mililitrski viali bo dala tok (mg/uro/cm^2). To določa, koliko psilocina preide na uro pri velikosti obliža cm^2.
To se še poglobi, saj je psilocin zelo nestabilen. naslednja publikacija, Structure Elucidation and Spectroscopic Analysis of Chromophores Produced by Oxidative Psilocin Dimerization, obravnava to vprašanje. Ko nastane dimer, ga z analizo HPLC in ATR-FTIR ni mogoče zaznati, kar je čudno. To raziskovalnim skupinam daje lažno pozitivne rezultate glede čistosti psilocina. Našel sem način za stabilizacijo psilocina v obližu.
Kakor koli že, začnimo! Vsak korak sem opravil sam, pri tem pa mi je pomagal moj partner, ki je kemijski inženir. To je bilo še v času, ko sem imel dovoljenje DEA s seznamoma 1 in 3, ne le za raziskave, ampak tudi za proizvodnjo.
Del I (sinteza psilocina)
korak 1: sinteza 3-[2-(dimetilamino)-2-oksoacetil]-1H-indol-4-il acetata
1a. Kolba s štirimi grli in okroglim dnom s prostornino 2000 ml je bila opremljena z zgornjim mešalnikom, regulatorjem temperature J-Kem, 250-mililitrskim kapljalnim lijem in gumijasto pregrado, skozi katero je bil doveden suhN2 pod pozitivnim tlakom. Odstranili smo pregrado in erlenmajerico enakomerno napolnili z 1H-indol-4-ilacetatom (5; 50,1 g, 285 mmol, 1 equiv)
nd anhid Et2O (700 ml). Bučko smo ponovno zaprli s pregrado in jo splaknili z N2. Suspenzijo smo mešali 10 min, nato pa
30 min ohlajali na 0 °C v ledeni vodni kopeli.
1b. V kapljični lij smo dodali raztopino oksali klorida (37,1 ml, 428 mmol, 1,5 ekviva) v Et2O (60 ml). Raztopino oksali klorida smo dodajali po kapljicah z zadostno hitrostjo, da smo ohranjali temperaturo na ali pod 5 °C, da bi zmanjšali nastajanje dimerov in drugih možnih stranskih produktov. Med dodajanjem je nastala rumena suspenzija 10 in ko je bilo dodajanje končano, smo zmes mešali 4 ure.
1c. Po tem času smo dodali heptan (400 ml) in zmes mešali 30 min pri 0 °C. Dobljeno rumeno trdno snov smo hitro filtrirali in zaporedno izpirali s heptanom (2 × 300 mL), ki smo ga hitro uporabili v naslednjem koraku. . 2,0 M raztopino dimetilamina v THF (175 mL) smo dodajali po kapljicah z zadostno hitrostjo, da smo ohranili temperaturo pod 5 °C, da bi zmanjšali stranske reakcije. Po
dodajanju smo po kapljicah dodajali piridin (46 mL) v THF (100 mL) in zmes dobro mešali 60 min. Dodali smo heptan (600 mL) in vsebino erlenmajerice filtrirali skozi Büchnerjev lijak. Prefiltrirani ostanek smo prenesli v bučko z okroglim dnom in dodali deionizirano H2O (1000 mL), mešali 30 min in filtrirali skozi Büchnerjev lijak. Belkasto trdno snov smo 40 min zaporedoma trituirali v EtOAc (600 mL) in heptanu (400 mL). Kašo smo filtrirali skozi Büchnerjev lijak in trdno snov sušili v sušilniku pri 40 °C čez noč, da smo dobili 6 kot svetlo rumeno trdno snov; izkoristek: 66,1 g (81 %); mp 205-207 °C.
ATR-FTIR je potrdil sintezo sinteze 3-[2-(dimetilamino)-2-oksoacetil]-1H-indol-4-il acetata. To spojino lahko hranimo pri 4C več mesecev!
Korak 2: Sinteza psilocina
Korak 2A: Kolba s štirimi grli in okroglim dnom s prostornino 2000 ml je bila opremljena z zgornjim mešalom, regulatorjem temperature J-Kem
250 mL kapljičnim lijakom in gumijasto pregrado, skozi katero je bil doveden suh N2 pod pozitivnim tlakom. Odstranili smo pregrado in
erlenmajerica se je zaporedno polnila z 3-[2-(dimetilamino)-2-oksoacetil]-1H-indol-4-il acetatom (6; 31,5 g, 115 mmol) in 2-CH3-THF (1000
mL). Bučko smo potopili v ledeno kopel pri 0 °C in dodali raztopino 2,3 M LiAlH4 v 2-CH3-THF (140 mL, 322 mmol) skozi
250 mL padajočega lijaka. Kapljični lijak smo splaknili z dodatnim 2-CH3-THF (20 mL). Raztopino LiAlH4 smo dodajali po kapljicah
tako hitro, da se vzdržuje temperatura pod 20 °C. Po dodajanju smo odstranili ledeno vodno kopel in zmes mešali 30 min.
Svetlo rumeno raztopino smo z ogrevalnim plaščem segreli do povratnega toka (80 °C) in po 3 urah postala slonokoščene barve.
rumene trdne snovi na straneh bučke z okroglim dnom
Korak 2C. Odstranili smo grelni plašč in erlenmajerico ohladili na 50 °C. Erlenmajerica je bila ponovno
ohladi na 20 °C. Reakcijo smo umirili z zaporednim dodajanjem 3 kapljic aq 1 M NaOH in 3 kapljic deioniziranega H2O. Mešanica
razredčili s THF (500 ml) in mešali 20 min. Mešanico smo filtrirali skozi Büchnerjev lijak, filtrat pa smo hranili pod N2.
Filtrirano pogačo smo hitro ponovno premešali z 200 mL [10 % raztopine (7 % amoniaka v MeOH) v CH2Cl2] in THF (500 mL). Filtrati
nato združili in zgoščili, da smo dobili zeleno trdno snov. Trdno snov smo triturirali z EtOAc/heptanom v razmerju 1:1 (50 mL), nato pa filtrirali skozi
Büchnerjev lijak. Temnozeleno trdno snov smo čez noč posušili v sušilniku pri 40 °C, da smo dobili suh psilocin (7) kot temnozeleno trdno snov; izkoristek: 20,7
g (91 %); mp 167-169 °C.
Psilocin je bil sintetiziran.
Del II: Razvoj transdermalnega obliža psilocina in študija in vitro (OPOZORILO: VIDELI BOSTE ČISTO ČLOVEŠKO LISINO, NJIHOVO GROZNO
Psilocin nato raztopim v patentirani mešanici akrilatnega polimera (v heptanu), nato raztopino vlijem v ločilno linijo in s pomočjo livnega noža dosežem, da je plast lepila 100 um. Ko se posuši, nanesem podlago in izrežem obliž velikosti 1 cm^2. Ta obliž se uporabi za študijo in vitro.
Naslednja fotografija je posnetek difuzijskega aparata (obliž na koži, pod katero teče voda).
Upam, da vam je bilo všeč!
To se še poglobi, saj je psilocin zelo nestabilen. naslednja publikacija, Structure Elucidation and Spectroscopic Analysis of Chromophores Produced by Oxidative Psilocin Dimerization, obravnava to vprašanje. Ko nastane dimer, ga z analizo HPLC in ATR-FTIR ni mogoče zaznati, kar je čudno. To raziskovalnim skupinam daje lažno pozitivne rezultate glede čistosti psilocina. Našel sem način za stabilizacijo psilocina v obližu.
Kakor koli že, začnimo! Vsak korak sem opravil sam, pri tem pa mi je pomagal moj partner, ki je kemijski inženir. To je bilo še v času, ko sem imel dovoljenje DEA s seznamoma 1 in 3, ne le za raziskave, ampak tudi za proizvodnjo.
Del I (sinteza psilocina)
korak 1: sinteza 3-[2-(dimetilamino)-2-oksoacetil]-1H-indol-4-il acetata
1a. Kolba s štirimi grli in okroglim dnom s prostornino 2000 ml je bila opremljena z zgornjim mešalnikom, regulatorjem temperature J-Kem, 250-mililitrskim kapljalnim lijem in gumijasto pregrado, skozi katero je bil doveden suhN2 pod pozitivnim tlakom. Odstranili smo pregrado in erlenmajerico enakomerno napolnili z 1H-indol-4-ilacetatom (5; 50,1 g, 285 mmol, 1 equiv)
nd anhid Et2O (700 ml). Bučko smo ponovno zaprli s pregrado in jo splaknili z N2. Suspenzijo smo mešali 10 min, nato pa
30 min ohlajali na 0 °C v ledeni vodni kopeli.
1b. V kapljični lij smo dodali raztopino oksali klorida (37,1 ml, 428 mmol, 1,5 ekviva) v Et2O (60 ml). Raztopino oksali klorida smo dodajali po kapljicah z zadostno hitrostjo, da smo ohranjali temperaturo na ali pod 5 °C, da bi zmanjšali nastajanje dimerov in drugih možnih stranskih produktov. Med dodajanjem je nastala rumena suspenzija 10 in ko je bilo dodajanje končano, smo zmes mešali 4 ure.
1c. Po tem času smo dodali heptan (400 ml) in zmes mešali 30 min pri 0 °C. Dobljeno rumeno trdno snov smo hitro filtrirali in zaporedno izpirali s heptanom (2 × 300 mL), ki smo ga hitro uporabili v naslednjem koraku. . 2,0 M raztopino dimetilamina v THF (175 mL) smo dodajali po kapljicah z zadostno hitrostjo, da smo ohranili temperaturo pod 5 °C, da bi zmanjšali stranske reakcije. Po
dodajanju smo po kapljicah dodajali piridin (46 mL) v THF (100 mL) in zmes dobro mešali 60 min. Dodali smo heptan (600 mL) in vsebino erlenmajerice filtrirali skozi Büchnerjev lijak. Prefiltrirani ostanek smo prenesli v bučko z okroglim dnom in dodali deionizirano H2O (1000 mL), mešali 30 min in filtrirali skozi Büchnerjev lijak. Belkasto trdno snov smo 40 min zaporedoma trituirali v EtOAc (600 mL) in heptanu (400 mL). Kašo smo filtrirali skozi Büchnerjev lijak in trdno snov sušili v sušilniku pri 40 °C čez noč, da smo dobili 6 kot svetlo rumeno trdno snov; izkoristek: 66,1 g (81 %); mp 205-207 °C.
ATR-FTIR je potrdil sintezo sinteze 3-[2-(dimetilamino)-2-oksoacetil]-1H-indol-4-il acetata. To spojino lahko hranimo pri 4C več mesecev!
Korak 2: Sinteza psilocina
Korak 2A: Kolba s štirimi grli in okroglim dnom s prostornino 2000 ml je bila opremljena z zgornjim mešalom, regulatorjem temperature J-Kem
250 mL kapljičnim lijakom in gumijasto pregrado, skozi katero je bil doveden suh N2 pod pozitivnim tlakom. Odstranili smo pregrado in
erlenmajerica se je zaporedno polnila z 3-[2-(dimetilamino)-2-oksoacetil]-1H-indol-4-il acetatom (6; 31,5 g, 115 mmol) in 2-CH3-THF (1000
mL). Bučko smo potopili v ledeno kopel pri 0 °C in dodali raztopino 2,3 M LiAlH4 v 2-CH3-THF (140 mL, 322 mmol) skozi
250 mL padajočega lijaka. Kapljični lijak smo splaknili z dodatnim 2-CH3-THF (20 mL). Raztopino LiAlH4 smo dodajali po kapljicah
tako hitro, da se vzdržuje temperatura pod 20 °C. Po dodajanju smo odstranili ledeno vodno kopel in zmes mešali 30 min.
Svetlo rumeno raztopino smo z ogrevalnim plaščem segreli do povratnega toka (80 °C) in po 3 urah postala slonokoščene barve.
rumene trdne snovi na straneh bučke z okroglim dnom
Korak 2C. Odstranili smo grelni plašč in erlenmajerico ohladili na 50 °C. Erlenmajerica je bila ponovno
ohladi na 20 °C. Reakcijo smo umirili z zaporednim dodajanjem 3 kapljic aq 1 M NaOH in 3 kapljic deioniziranega H2O. Mešanica
razredčili s THF (500 ml) in mešali 20 min. Mešanico smo filtrirali skozi Büchnerjev lijak, filtrat pa smo hranili pod N2.
Filtrirano pogačo smo hitro ponovno premešali z 200 mL [10 % raztopine (7 % amoniaka v MeOH) v CH2Cl2] in THF (500 mL). Filtrati
nato združili in zgoščili, da smo dobili zeleno trdno snov. Trdno snov smo triturirali z EtOAc/heptanom v razmerju 1:1 (50 mL), nato pa filtrirali skozi
Büchnerjev lijak. Temnozeleno trdno snov smo čez noč posušili v sušilniku pri 40 °C, da smo dobili suh psilocin (7) kot temnozeleno trdno snov; izkoristek: 20,7
g (91 %); mp 167-169 °C.
Psilocin je bil sintetiziran.
Del II: Razvoj transdermalnega obliža psilocina in študija in vitro (OPOZORILO: VIDELI BOSTE ČISTO ČLOVEŠKO LISINO, NJIHOVO GROZNO
Psilocin nato raztopim v patentirani mešanici akrilatnega polimera (v heptanu), nato raztopino vlijem v ločilno linijo in s pomočjo livnega noža dosežem, da je plast lepila 100 um. Ko se posuši, nanesem podlago in izrežem obliž velikosti 1 cm^2. Ta obliž se uporabi za študijo in vitro.
Naslednja fotografija je posnetek difuzijskega aparata (obliž na koži, pod katero teče voda).
Upam, da vam je bilo všeč!
